分析PCR擴增的重要標準

發布時間:2017-07-21

什么是PCR實驗的靈敏度?

靈敏度指的是PCR擴增反應能夠檢測到目的基因的最小值。研究結果表明,影響PCR擴增效率的因素,如模板的復雜程度與完整性、引物的純度及其與模板的結合效率、反應溫度、DNA聚合酶的熱穩定性與擴增性能、反應緩沖液的離子組成(主要指陽離子)、反應優化劑等等,都決定了PCR實驗的檢測靈敏度。在最佳的擴增條件下,常規PCR反應能夠檢測到的pg(10-12g)數量級的目的基因。對于一個特定的目的基因而言,模板與引物通常都是已經限定好的因素。因此,選擇什么樣的PCR反應體系(包括DNA聚合酶與反應緩沖液等)就是研究者提高PCR實驗靈敏度的關鍵因素了。

與實驗室自配的PCR擴增體系相比,東盛的Taq Mix對反應緩沖液中的成分進行優化,并加入了適當比例的反應增強劑(PCR Enhancer),提高了DNA聚合酶的熱穩定性,顯著降低模板的二級結構對PCR擴增性能的影響,使得DNA聚合酶處于最適活性狀態,從而獲得了比自配體系更高的檢測靈敏度。即時反應體系中只有幾個目的基因的拷貝,也能輕松檢測。

什么是PCR實驗的特異性?

特異性指的是在PCR擴增過程中,專一性地擴增目的片段而非其他片段的性能。在PCR實驗本身的靈敏度很高,且實驗條件未充分優化的情況,通常會在目的片段出現的同時伴隨有其他的雜帶,即發生非特異性擴增的現象。模板、引物性質及質量、反應條件的控制等均會影響PCR擴增的特異性。近年來的研究結果表明,緩沖液的品質(如離子種類與組成,反應優化劑等)對保證PCR的特異性擴增起著不可忽視的作用。一般的緩沖液中調節氫鍵作用的鹽只有KCl,而東盛HSTM TaqMix的緩沖體系通過反應優化劑以及KCl/(NH4)SO4鹽離子體系的平衡調節,顯著提高了PCR擴增的特異性,降低背景。    

PCR實驗的靈敏度與特異性是一對此長彼消的特性,這也決定我們實驗體系調節實際就是找到適合實驗的靈敏度與特異性的平衡點。由于PCR體系中的眾多成分,使得組合較多,篩選工作繁雜。東盛基于靈敏度與特異性分別設計了PCR Mix和HS Taq Mix,幫您確定大的平衡點,如果您需要更細致的平衡點,請選擇相應的Mix Kit系列進行微調。


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