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通用菌落PCR檢測試劑盒(P8011-P8012)

價格: 143.00~1053.00

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P8011(50次) P8012(500次)

通用菌落PCR檢測試劑盒

Cat. #P8011P8012

產品簡介

本試劑盒利用PCR原理,結合本公司的快速DNA聚合酶(延伸速率20s/kb),設計適用性廣的最佳引物,優化PCR反應緩沖體系,同時簡化檢測方法,可用于各種常用T載體克隆的篩選檢測。

 

產品組成

Component

P8011

P8012

2× FSTM Mix

500 μl

1 ml × 5

T-primer (10 μM)

50 μl

500 μl

超純水

1 ml

1 ml × 10

說明書

1

1

 

活性定義

一個活性單位(U)指用活性化的大馬哈魚精子DNA作為模板/引物,在72℃30 min內,攝入10 nmol全核苷酸所需的酶量。

 

保存條件

-20℃保存。

 

質量控制

純度檢測:經質量檢測,產品不含脫氧核糖核酸內切酶、脫氧核糖核酸外切酶和核糖核酸酶污染。

功能檢測:PCR方法檢測本試劑盒無宿主殘余DNA,也無其他DNA污染,能有效完成PCR擴增。

 

應用舉例

1. 準備樣品

將過夜培養的平板上的菌落編號后,用滅菌的牙簽挑取單克隆菌體的一部分至反應體系中;或在1.5 ml EP管中分裝500 μl含有相應抗生素的LB培養基,并做好標記,用無菌牙簽提取單個菌落至上述培養基中,37振蕩(250-300rpm)培養4h,取1-2 μl菌液用于擴增。

2. 配制反應體系

請于冰上配置反應體系,體系大小與組分用量與添加順序可調整:

Ordinal

Component

Volume

(20 μl reaction volume)

1

2× FSTM   Mix

10   μl

2

T-primer (10 μM)*

1 μl

3

菌體或菌液

1 μl

4

超純水

To   20 μl

*包含了上下游引物,擴增大小約為:克隆片段+250 bp

加入各組分后,請用槍頭反復吸吹幾次,充分混勻。

在一次配制多管需分裝時建議按(n+1)的反應液量配制,以確保分配時的耗損不會影響實驗,同時選擇大于總體積的離心管便于混勻。

如需使用其他體積的PCR反應體系,請按各組分比例縮減或增加各組分用量。

將混勻的各管短暫離心,置于PCR儀中。

 

3. 設定反應程序進行PCR反應

Stage  

Temperature

Time

Number   of Cycles

Initial   Denaturation

94℃

3   min

1

Denaturation

94℃

30   sec

30

Annealing

55℃

30   sec

Extension

72℃

30   sec or 45 sec

Final   Extension

72℃

5   min

1

設定PCR程序時,請根據目的片段大小決定延伸時間,如果目的片段大小為500 bp時,延伸時間為15 sec500 bp-1 kb,延伸時間20 sec;目的片段>1 kb時,延伸時間按20s/kb計算。

 

3. 分析結果

反應結束后取2-5 μl反應產物與loading buffer混勻后進行瓊脂糖凝膠電泳,通過凝膠成像設備觀察目的條帶的擴增情況。

 

注意事項

請嚴格按照說明書提供的實驗體系及實驗條件進行試驗。

室溫下DNA聚合酶有一定的活性,為避免發生非特異性擴增,請于冰上配置反應體系,并且最后添加FSTM Mix或模板DNA

挑取菌落時,應選擇單菌落,不要挑取太多菌體,以免影響PCR結果。

部分適用T載體參考下表:

公司

T載體

Promega

pGEM-T   Vector

pGEM-T   Easy Vector

Takara

pMD18-T   Vector

pMD19-T   Vector

pMD20-T   Vector

pMD18-T   Simple Vector

pMD19-T   Simple Vector

pSIMPLE-18   EcoR V/BAP Vector

pSIMPLE-19   EcoR V/BAP Vector

Tiangen

pGM-T載體

pBS-T載體

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