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RT-PCR Mix for qPCR(預混型逆轉錄試劑盒)R1031

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R1031 /100次(20 μl反應體系)

RT-PCR Mix for qPCR預混型逆轉錄試劑盒)

貨號:R1031   規格:100次(20 μl反應體系)

 

產品說明

RT-PCR Mix for qPCR是預混型逆轉錄反應試劑盒,操作簡便,可快速高效完成逆轉錄反應。其中Enzyme Mix含有高效逆轉錄酶和熱敏型DNase,一步完成基因組DNA的清除以及RNA的逆轉錄反應,RT Buffer包含逆轉錄反應所需的其他組分,無需分步多次加樣,降低了樣品污染的風險。同時,本試劑盒配備了Control Mix,用于陰性對照反應,檢驗RNA模板中是否有基因組DNA殘留。本試劑盒的逆轉錄產物對染料法和探針法熒光定量PCR反應均有很好的兼容性,可進行精準的基因表達分析

 

產品組分

組分

R1031100

Enzyme Mix

100 μl

5X RT Buffer

400 μl

Control Mix

20 μl

RNase-free ddH2O

1 ml × 2

 

保存條件

各組分均-20℃保存,并避免反復凍融。

 

適用范圍

第一鏈cDNA 合成

 

注意事項

本品含有熱敏型DNase,請于冰上使用本品各組分。

為保證成分均勻,請將Enzyme Mix5X RT BufferControl Mix分別瞬時離心、吹打混勻后再吸取使用。

在操作過程中,注意防止引入RNase導致RNA降解RNA最好保存于-70℃,避免反復凍融。

cDNA產物應置于-20℃或以下保存避免反復凍融

 

操作步驟

1. 配制反應體系

按以下體系,在冰浴的無菌無酶離心管中配制反應混合液:

組分

用量

5X RT Buffer

4 μl

Enzyme Mix

1 μl

RNA

1pg-1μg

RNase-free ddH2O

補足至20 μl 

 

陰性對照反應(可選)

即不加逆轉錄酶的反應,產物用于在qPCR中作為陰性對照,檢驗模板RNA中是否有基因組DNA殘留

按以下體系,在冰浴的無菌無酶離心管中配制反應混合液:

組分

用量

5X RT Buffer  

4 μl

Control Mix

1 μl

RNA

1pg-1μg

RNase-free ddH2O

補足至20 μl 

 

2. 進行逆轉錄反應

將上述混合液吹打混勻,瞬時離心收集至管底。按以下程序,在PCR儀中進行反應:

溫度

時間

50

15 min

85

5 sec

 

3. qPCR反應及cDNA保存

cDNA產物可稀釋后立即進行染料法或探針法qPCR反應。若使用未稀釋的cDNA原液,則體積不能超過反應體系的1/10,以避免抑制反應效率。長期保存cDNA產物應于-20℃或以下環境中并避免反復凍融

 


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