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PCR教學試劑盒 (P8021-P8022)

價格: 234.00

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P8021(30次 500 bp) P8022( 30次 1,000 bp)

PCR教學試劑盒

Cat. #P8021P8022

產品簡介

本試劑盒是按照教學實驗內容設計的,符合標準擴增流程的,教學用PCR反應試劑盒。本試劑盒所提供的模板為插入特定大小DNA片段的PBluescipt SK+)重組質粒;引物為根據所插入DNA序列和擴增片段大小不同設計的上下游引物。PCR結果可獲得特定大小(500 bp1,000 bp)的PCR產物。

 

產品組成

Component

P8021

500 bp30次)

P8022

1,000 bp30次)

DNA模板

150 μl500 bp

150 μl1,000 bp

上游引物 (10 μM)

75 μl

75 μl

下游引物(10 μM)

75 μl

75 μl

dNTP混合物(2.5 mM)

150 μl

150 μl

Taq DNA聚合酶(2.5 U/μl)

40 μl

40 μl

10×PCR緩沖液

500 μl

500 μl

超純水

1 ml

1 ml

說明書

1

1

 

活性定義

一個活性單位(U)指用活性化的大馬哈魚精子DNA作為模板/引物,在72℃30 min內,攝入10 nmol全核苷酸所需的酶量。

 

保存條件

10×PCR緩沖液保存于4℃,其他成分-20℃保存。

 

質量控制

純度檢測:經質量檢測,產品不含脫氧核糖核酸內切酶、脫氧核糖核酸外切酶和核糖核酸酶污染。

功能檢測:PCR方法檢測本試劑盒無宿主殘余DNA,也無其他DNA污染,能有效完成PCR擴增。

 

應用舉例

1. 配制反應體系

請于冰上配置反應體系,體系大小與組分用量與添加順序可調整:

Ordinal

Component

Volume

(25 μl reaction volume)

Volume

(50 μl reaction volume)

Volume

(50 μl reaction volumen)

1

10×PCR緩沖液(Mg2+ Plus

2.5 μl

5 μl

5×(n+1) μl

2

dNTPs2.5mM

2 μl

4 μl

4×(n+1) μl

3

上游引物   (10 μM)

1 μl

2 μl

2×(n+1) μla μl×(n+1)

4

下游引物   (10 μM)

1 μl

2 μl

2×(n+1) μla μl×(n+1)

5

Taq   DNA聚合酶(2.5U/μl

0.5 μl

1 μl

1×(n+1) μla μl×(n+1)

6

template   DNA

2 μl

4 μl

4×(n+1) μla μl×(n+1)

7

超純水

16 μl

32 μl

32×(n+1) μl

8

石蠟油

如不能設置頂蓋溫度,需適量加入石蠟油。

加入各組分后,請用槍頭反復吸吹幾次,充分混勻。

在一次配制多管需分裝時建議按(n+1)的反應液量配制,以確保分配時的耗損不會影響實驗,同時選擇大于總體積的離心管便于混勻。

如需使用其他體積的PCR反應體系,請按各組分比例縮減或增加各組分用量。

組分中引物、DNA模板、Taq DNA聚合酶常用于梯度實驗,如有調整,請注意調超純水的用量至相應的體系。

將混勻的各管短暫離心,置于PCR儀中。

 

2. 設定反應程序進行PCR反應

Stage  

Temperature

Time

Number   of Cycles

Initial   Denaturation

94

3   min

1

Denaturation

94

30   sec

30

Annealing

55

30   sec

Extension

72

30   sec or 45 sec

Final   Extension

72

5   min

1

設定PCR程序時,請根據目的片段大小決定延伸時間,如果目的片段大小為500 bp時,延伸時間為30 sec,目的片段為1 kb時,延伸時間為45 sec

 

3. 分析結果

反應結束后取2-5 μl反應產物與loading buffer混勻后進行瓊脂糖凝膠電泳,通過凝膠成像設備觀察目的條帶的擴增情況。

500 bp產物建議電泳條件為1.7%瓊脂糖凝膠,0.5×TBE7 V/cm20-40 min,建議Marker DSTM 2000M1101)。

1 kb產物建議電泳條件為1.0%瓊脂糖凝膠,1×TAE7 V/cm20-40 min,建議Marker DSTM 5000M1111)。

 

注意事項

請嚴格按照說明書提供的實驗體系及實驗條件進行試驗。

室溫下Taq DNA聚合酶有一定的活性,為避免發生非特異性擴增,請于冰上配置反應體系,并且最后添加Taq DNA聚合酶或模板DNA

挑取菌落時,應選擇單菌落,不要挑取太多菌體,以免影響PCR結果。

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