產品中心 > 長片段PCR > Long Taq DNA聚合酶(P1061-P1062-P1063-P1064)

Long Taq DNA聚合酶(P1061-P1062-P1063-P1064)

價格: 260.00~988.00

分享

運費 ¥0.00
P1061(250 U) P1062(250 U) P1063(1000 U) P1064(1000 U)

Long Taq DNA聚合酶

Cat. #P1061P1062P1063P1064

產品簡介

Long Taq DNA聚合酶是專門用于擴增長片段的嗜熱DNA聚合酶,其保真性是普通Taq DNA聚合酶的3倍左右。擴增片段的長度可達20 kb(簡單模板)。在擴增復雜模板(如GC-rich或重復序列)時,Long Taq DNA聚合酶的擴增效率顯著高于Taq DNA聚合酶。因此Long Taq DNA聚合酶適合>5kbDNA片段及復雜模板的擴增。延伸速度為20s/kb70~75℃,簡單模板可達5s/kb)。擴增產物具有兩種末端:平末端與3'-dA

產品組成

Component

P1061

250U

P1062

250U

P1063

1,000U

P1064

1,000U

Long Taq DNA聚合酶(5U/μl[1]

50 μl

50 μl

200 μl

200 μl

Long Taq DNA聚合酶(2.5U/μl[1]

100 μl

100 μl

400 μl

400 μl

10× Long PCR Buffer I [2]

1.25 ml

1.25 ml

1.25 ml × 2

1.25 ml × 2

10× Long PCR Buffer II[2]

1.25 ml

1.25 ml

1.25 ml × 2

1.25 ml × 2

6× Loading Buffer[3]

1 ml

1 ml

1 ml

1 ml

dNTPs2.5mM[4]

-

1 ml

-

1 ml × 2

PCR Enhancer[5]

500 μl

500 μl

500 μl× 2

500 μl× 2

[1] 提供5U/μl2.5U/μl兩種活性單位的包裝可供選擇,如無特別說明默認5U/μl

[2] 10× Long PCR Buffer I 是經典的Long Taq DNA聚合酶緩沖液,擴增長片段特別是10 kb以上片段可保證獲得最好的擴增效果。10× Long PCR Buffer II是東盛自主研發的Long Taq DNA聚合酶緩沖液,可以顯著的提高酶的靈敏度與保真性,在擴增低濃度模板時具有明顯優勢,但是對長片段(大于13kb片段)的擴增效果不如Buffer I

[3] 6× Loading Buffer,如有需要可單獨購買(Cat. #M9041)。

[4] dNTPsdATPdGTPdCTPdTTP等摩爾混合物,P1061/P1063不含dNTPs,如有需要請單獨購買(Cat. #P9011/P9012/P9013)。

[5] PCR Enhancer主要通過降低DNA模板的解鏈溫度,促進DNA模板的有效擴增,增加PCR反應的靈敏度和特異性。可單獨訂購(Cat. #P9041)。

活性定義

一個活性單位(U)指用活性化的大馬哈魚精子DNA作為模板/引物,在72℃30 min內,攝入10 nmol全核苷酸所需的酶量。

保存條件

-20℃保存2年。

質量控制

純度檢測:經質量檢測,產品不含脫氧核糖核酸內切酶、脫氧核糖核酸外切酶和核糖核酸酶污染。

功能檢測:PCR方法檢測無宿主殘余DNA,能有效擴增人基因組中的單拷貝基因。

應用舉例

1. 配制反應體系

請于冰上配置反應體系,體系大小與組分用量與添加順序可調整:

Ordinal

Component

Volume

(50 μl reaction volume)

Final concentration

(50 μl reaction volume)

optional

PCR Enhancer

4-16 μl

-

1

10× Long PCR Buffer I/ II [1]

5 μl

2

dNTPs2.5mM

4 μl

0.4 mM

3

upstream primer (10 μM)[2]

2 μl

0.4 μM

4

downstream primer (10 μM)[2]

2 μl

0.4 μM

5

Long Taq DNA聚合酶(5U/μl[3]

0.5 μl

2.5U

6

template DNA[4]

1-4 μl

<1μg

7

超純水[5]

To 50 μl

-

optional

MgCl2(MgSO4)[6]

Variable

-

optional

PCR Enhancer

4-16 μl

-

[1] 10× Long PCR Buffer I 10× Long PCR Buffer II 均已添加Mg2+

[2] 引物終濃度建議范圍:0.1-1 μM。特異性差時可降低濃度,效率低時可提高濃度。

[3] 根據目的片段擴增的難易程度調整DNA聚合酶的用量。

[4] 不同模板最佳用量不同,部分DNA模板建議用量如下表(50 μl反應體系)。

Template

Dosage

人類基因組DNA

0.1μg-1μg

λDNA

0.5ng-5ng

大腸桿菌基因組DNA

10ng-100ng

質粒DNA

0.1ng-10ng

[5] 可單獨訂購超純水(Cat. #P9021/P9022/P9023)。

[6] 可單獨訂購25mM MgCl2Cat. #P9031)。

2. 設定反應程序進行PCR反應

Stage

Temperature

Time

Number of Cycles

Initial Denaturation

94℃

3 min

1

Denaturation

94℃

30 sec

25-35

Annealing

55-68℃[1]

30 sec

Extension

72℃

Variable[2]

Final Extension

72℃

5-10 min

1

[1] 退火溫度應根據Tm值較低的引物來設。

[2] 延伸時間按20s/kb來設最佳(簡單模板可達5s/kb)。

3. 分析結果

將產物與loading buffer混勻后進行瓊脂糖凝膠電泳,通過凝膠成像設備觀察目的條帶的擴增情況。如有需要,可進行割膠回收。

無產物或產物量少的改進措施有:1調整退火溫度;2減少抑制劑的影響,如提取的基因組DNA中含有抑制擴增的成分,需要高倍稀釋(1: 10000)后使用;3采用乙醇沉降洗脫,提高模板DNA的純度;4使用PCR添加劑,如PCR EnhancerCat. #P9041MgCl2Cat. #P9031等可提高產量。

操作注意事項

1 室溫下Long Taq DNA聚合酶有一定的活性,為避免發生非特異性擴增,請于冰上配置反應體系,并且最后添加Long Taq DNA聚合酶或模板DNA

2 Long Taq DNA聚合酶的擴增產物有兩種末端:平末端和3'-dA突出末端。如要進行TA克隆,請先進行加A反應,以提高克隆效率。(加A反應:參考如下體系,72℃15-30min

PCR(純化)產物

1-7 μl

10× Taq BufferMg2+ Plus

1 μl

dATP

0.2 mM

Taq DNA聚合酶

5U

超純水

To 10 μl

3 Long Taq DNA聚合酶既可擴增長片段的DNA,也可擴增小片段(幾百bp)的DNA

4 PCR Enhancer主要在Long Taq DNA聚合酶擴增無結果或擴增效果不好時使用。使用后退火溫度需在原溫度上降低2-3℃,否則會降低PCR效率,建議使用Tm值較高的引物。PCR Enhancer能夠與所有的耐熱DNA聚合酶共同作用。

引物設計注意事項

引物長度一般在15-30個堿基之間;上下游引物3’末端避免互補,避免出現3個以上重復的GC,或出現發夾結構,否則會產生非特異性擴增;GC含量控制在40-60%,且上下游引物GC含量盡量接近;Tm值控制在55-65℃之間,且上下游引物Tm值盡量接近,額外附加序列(酶切位點、修飾等)是非模板匹配序列,不參與Tm值計算。

相關產品

名稱

貨號

規格

PCR Mix

P2011/P2012/P2013/P2014/P2015

1ml/5ml/10ml/50ml/100ml

Power Green qPCR Mix

P2101/P2102/P2103/P2104/P2105

1ml/5ml/10ml/50ml/100ml

1kb ladder

M1181/M1182

50/250

DSTM5000

M1111/M1112

60/300

高純度質粒小提試劑盒

N1011/N1012/N1013

50/100/200

通用RNA提取試劑盒

R1051

50

基因組DNA快速提取試劑盒

N1111/N1112

50/100

DNA凝膠回收試劑盒

N1071/N1072/N1073

50/100/200

RT-PCR Kit

R1011/R1012

20/100

更多PCR酶、DNA Marker及核酸提純類產品請登錄東盛生物官網查詢。

 

 


姓名
電話號碼
電子郵箱
公司名稱
地址
留言*
 
驗證碼
提交
五月天小说_一个人免费视频在线观看www_天天做日日做天天添天天欢公交车_野花视频在线观看播放免费_真人男女猛烈裸交动态图