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DH5α感受態細胞(C1041-C1042)

價格: 117.00~208.00

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C1041 C1042

DH5α感受態細胞

產品簡介

本公司生產的DH5α感受態細胞是采用大腸桿菌DH5α菌株經特殊工藝處理得到的感受態細胞,可用于DNA的化學轉化。使用pUC19質粒檢測,轉化效率可達108個轉化子/μg質粒DNA-70℃保存3個月轉化效率可保持在90%以上。每支感受態可以酌情分裝使用,降低了實驗的成本。質量穩定,使用方便,質優價廉。

基因型:F-φ80lacZΔM15Δ(lacZYA-argF)U169 recA1endA1hsdR17(rk-mk+)phoAsupE44λ-thi-1gyrA96relA1

 

產品組分

貨號

C1041

C1042

感受態細胞

5×100 μl

10×100 μl

對照質粒pUC191 ng/μl

10 μl

10 μl

說明書

1

1

 

產品特點

DH5α菌株一種常用于質粒克隆的菌株。其φ80lacZΔM15基因的產物可與pUC載體編碼的β-半乳糖苷酶氨基端實現α互補,可用于藍白斑篩選。recA1endA1的突變有利于克隆DNA的穩定和高純度質粒DNA的提取。

 

保存條件

低溫運輸,-70℃凍存。

 

操作方法(以下操作均按無菌條件的標準進行)---------------------------------------------------------

1 取感受態細胞置于冰浴中,如需分裝可將剛融化的細胞懸液分裝到無菌預冷的離心管中,置于冰浴中。

一次轉化感受態細胞的建議用量為50-100 μl,可以根據實際情況分裝使用。應注意所用DNA體積不要超過感受態細胞懸液體積的十分之一。

以下實驗以100 μl感受態細胞為例。

2 向感受態細胞懸液中加入目的DNA,輕輕旋轉離心管以混勻內容物,在冰浴中靜置30分鐘。

3 將離心管置于42℃水浴中放置90秒,然后快速將管轉移到冰浴中,使細胞冷卻2-3分鐘,該過程不要搖動離心管。

4 向每個離心管中加入500 μl無菌的SOCLB培養基(不含抗生素),混勻后置于37℃搖床振蕩培養1小時(160 - 220 /分鐘),目的是使質粒上相關的抗性標記基因表達,使菌體復蘇。

5 將離心管內容物混勻,吸取100 μl已轉化的感受態細胞加到含相應抗生素的SOBLB固體瓊脂培養基上,用無菌的彎頭玻棒輕輕的將細胞均勻涂開。將平板置于室溫直至液體被吸收,倒置平板,37℃培養12-16小時。

涂布用量可根據具體實驗來調整。如轉化的DNA總量較多,可取更少量轉化產物涂布平板;反之,如轉化的DNA總量較少,可取 200-300 μl 轉化產物涂布平板。如果預計的克隆較少,可通過離心(4,000 rpm, 2分鐘)后吸除部分培養液,懸浮菌體后將其涂布于一個平板中。(涂布剩余的菌液可置于4保存,如果次日的轉化菌落數過少可以將剩下的菌液再涂布新的培養板。)

 

注意事項----------------------------------------------------------------------------------------------------------

1. 感受態細胞應保存在-70℃,不可多次凍融和放置時間過長,以避免降低感受態細胞的轉化效率。

2. 進行轉化操作時,應根據相應溫度及無菌條件的要求進行。

3. 為防止轉化實驗不成功,可以保留部分連接反應液,以重新轉化,將損失降到最低。


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